1.研究背景與目的：

中藥在治療多種疾病中發(fā)揮重要作用，但中藥中具有藥理活性的成分大多未明。

傳統(tǒng)篩選活性成分的方法耗時(shí)耗力，且成本高昂。

本研究旨在建立一種敏感、高效、便捷的方法，用于從中藥復(fù)雜提取物中篩選針對TNF-R1的活性成分。

2.研究方法：

SPR生物傳感器篩選：利用SPR生物傳感器實(shí)時(shí)監(jiān)測化合物與固定在傳感器表面的TNF-R1之間的相互作用。

樣品制備：選取五種已知具有潛在抗炎活性的中藥（大黃、丹參、大青葉、甘草、黃芪），制備其提取物。

濃度調(diào)整：通過HPLC分析調(diào)整各提取物濃度，確保在SPR篩選中具有可比性。

活性成分回收與鑒定：從與TNF-R1結(jié)合的成分中回收樣品，通過UPLC-QTOF/MS進(jìn)行鑒定。

3.實(shí)驗(yàn)步驟：

TNF-R1固定：通過胺耦合方法將TNF-R1固定在CM5傳感器芯片表面。

SPR篩選：將調(diào)整濃度后的中藥提取物注入SPR系統(tǒng)，監(jiān)測與TNF-R1的結(jié)合情況。

活性成分回收：通過注射和回收程序從傳感器表面回收與TNF-R1結(jié)合的成分。

UPLC-QTOF/MS分析：對回收的樣品進(jìn)行UPLC-QTOF/MS分析，鑒定活性成分。

藥理實(shí)驗(yàn)：在L929細(xì)胞中驗(yàn)證PMG的抗炎活性。

4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

活性成分識別：在大黃提取物中發(fā)現(xiàn)顯著的響應(yīng)信號，進(jìn)一步分析鑒定出physcion-8-O-β-D-monoglucoside（PMG）為活性成分。

親和力測定：SPR親和力分析顯示PMG與TNF-R1的親和力常數(shù)為376nM，表明PMG是TNF-R1的強(qiáng)效配體。

藥理活性驗(yàn)證：PMG在L929細(xì)胞中抑制TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性和凋亡，驗(yàn)證了其抗炎活性。

5.技術(shù)優(yōu)勢：

SPR生物傳感器的優(yōu)勢：高靈敏度、高分辨率和特異性，能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測配體-受體相互作用。

聯(lián)用技術(shù)的優(yōu)勢：SPR與UPLC-MS聯(lián)用，克服了SPR無法提供結(jié)構(gòu)信息的局限，實(shí)現(xiàn)了從復(fù)雜混合物中直接篩選并鑒定活性成分。

高效篩選：該方法能夠高效篩選出微量但具有強(qiáng)親和力的活性成分，提高了篩選效率。

6.結(jié)論與意義：

本研究成功建立了一種基于SPR和UPLC-MS聯(lián)用技術(shù)的高效篩選方法，用于從中藥復(fù)雜提取物中篩選并鑒定TNF-R1的活性配體。

PMG作為新發(fā)現(xiàn)的TNF-R1配體，具有顯著的抗炎活性，為中藥現(xiàn)代化研究提供了新思路。

該方法具有廣泛的應(yīng)用前景，可用于分析中藥及其他復(fù)雜藥物系統(tǒng)中的活性成分。

這份文件詳細(xì)闡述了使用SPR和UPLC-MS聯(lián)用技術(shù)從中藥中篩選并鑒定TNF-R1活性配體的全過程，展示了該方法在中藥現(xiàn)代化研究中的潛力和應(yīng)用價(jià)值。

垂釣方法描述

研錦生物可以利用基于靶點(diǎn)或小分子結(jié)構(gòu)的藥物設(shè)計(jì)方法，對可購買化合物、天然產(chǎn)物等數(shù)據(jù)庫進(jìn)行虛擬篩選，并獲得潛在活性的化合物列表供進(jìn)一步活性實(shí)驗(yàn)確證。面向制藥企業(yè)和科研院所，可提供一站式的早期藥物研發(fā)服務(wù)，包括虛擬藥物篩選、先導(dǎo)優(yōu)化、靶標(biāo)預(yù)測、 動(dòng)力學(xué)模擬等，涉及小分子化學(xué)藥、生物藥、中藥等多種新藥類型，為您提供優(yōu)質(zhì)的藥物發(fā)現(xiàn)服務(wù)