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抗體專題資料

抗體亞型鑒定

亞型指的是相同的構成方式,但是空間結構不同的蛋白質結構??贵w亞型,指的是在機體內產生的“Y”構型的免      疫球蛋白(Ig),基于小分子多肽結構上的差異,可以進一步的進行細分。

抗體亞型

重鏈
抗體以一個或者多個“Y”字形單體存在,每個“Y”字形單體由 4 條多肽鏈組成,包含兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈。 通常,抗體的種類由重鏈決定。例如哺乳動物 Ig 的重鏈一共有五種,分別用希臘字母α、δ、ε、γ和 μ 來命名,相對應組成的抗體就稱為 IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM。其中,人的γ可以進一步細分為γ1、γ2、γ3、γ4 等亞類,分別對應 IgG1, IgG2, IgG3 和 IgG4 四個亞型,小鼠γ可以進一步細分為γ1、γ2a、γ2b、γ3 等亞類,分別對應 IgG1, IgG2a, IgG2b 和 IgG3 四個亞型。
 

輕鏈
哺乳動物有兩種輕鏈:λ型和κ型。出于科研的需要,人們也會對輕鏈的亞型進行鑒定。

類/亞類

重鏈

輕鏈

分子量(kDa)

結構

功能

IgA1
IgA2

 

α1α2

 

λ或κ

150-600

單體-四聚體

 

IgA 有血清型和分泌型,血清型 IgA 不顯示重要的免疫功能,分泌型 IgA 存在于分泌液中,如唾液、淚液、初乳、鼻和支氣管分泌液等,是機體粘膜局部抗感染免疫的主要抗體。

功能不詳;

IgD

δ

λ或κ

150

單體

與 IgM 共同存在于 B 細胞發育的各個階段;大部分與 B 細胞結合。

IgE

ε

λ或κ

190

單體

結合變應原引發巨細胞釋放組胺,可以對抗寄生蟲感染。

IgG1 IgG2 IgG3 IgG4

γ1

γ2

λ

γ3

γ4

λ或κ

150

單體

血清中最主要的免疫球蛋白。在免疫反應中最主要的抵 御病原的侵襲的抗體為 IgG;

可通過胎盤。

IgM

μ

λ或κ

900

五聚體

最早產生的反應性抗體,在 B 細胞表面表達,分泌型有很高的親和力。在 B 細胞介導的免疫反應早期,產生足夠的 IgG 之前發揮消除病原菌的作用。

表 1:不同亞型抗體的結構與功能    

抗體亞型鑒定
抗體亞型鑒定的原理是利用酶聯免疫吸附實驗(ELISA),測定待測抗體與不同亞   型特異性的抗體的結合情況,找出可以與待測抗體特異性結合的抗體,由于與待測抗體結合的抗體的特異性都是已知的,依據結合抗體的特異性可以得出待測抗體的亞型。以小鼠抗體亞型的測定為例,利用 ELISA 測定待測抗體與針對小鼠 IgG1、IgG2A、 IgG2B、 IgG3、IgM、λ、κ有特異性的抗體的結合情況。如果待測抗體抗體可以與針對小鼠 IgG1 的特異性抗體結合(通過肉眼觀察顏色深淺或通過測OD 值判斷),則該抗體的亞型為 IgG1。以此類推,也可以測出輕鏈的亞型。

抗體亞型的鑒定

鑒定方法
目前比較常用的方法是利用試劑盒進行抗體亞型的鑒定,按照試劑盒說明書進行操作,便可以直觀的讀出抗體的亞      型。

利用試劑盒鑒定抗體亞型常見問題與解決方法:
樣本中抗體濃度過高再將樣本 1:2-1:10 稀釋

常見問題

可能原因

解決方案

多種重鏈結果

腹水中有雜抗體

雜交瘤細胞中含有多種細胞系

將腹水樣本至少 1:100000 稀釋
亞克隆雜交瘤細胞

結果難以判定

多種重鏈或輕鏈結果

再將樣本 1:4 或 1:8 稀釋后重新檢測

顯色較慢或顏色較弱

樣本中抗體濃度低

減少稀釋倍數;延長顯色時間

表 2:常見問題與解決方案


抗體亞型鑒定的意義
不同亞型的抗體在結構上有所區別,其免疫源性與在體內發揮的作用存在差異,對抗體進行進一步的細分,并進行      抗體亞型鑒定,對于疾病作用機理的研究、抗體藥物的開發有重要意義。

相關服務
抗體亞型鑒定服務:IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3,IgM,IgA 的鑒定。
 


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