av大尺度一区二区三区-亚洲国产成人最新精品-国产v片在线播放免费无码-天天摸夜夜添狠狠添婷婷-久久国产色av免费看

穩轉株構建基本原理與步驟【新手入門】

2022-08-06 點擊數:0 分享至:

細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標志的培養細胞。從培養代數來講,可培養到40-50代。且細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。對于人類腫瘤細胞,在體外培養半年以上,生長穩定,并連續傳代的即可稱為連續性株或系。

將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上,載體被轉染到宿主細胞并整合到宿主染色體中,用載體中所含的抗性標志進行篩選,篩選來得到可穩定表達目的蛋白,或者穩定表達沉默特定基因的細胞株。

最常用的真核表達載體的抗性篩選標志物有新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)和嘌呤霉素(puromycin)。


多克隆穩轉株的熒光通常強弱夾雜,從感染72小時后開始加入篩選藥物,每隔2天重新換液加入篩選藥物。藥物篩選需至少持續14天,直至顯微鏡下觀察到的熒光細胞比例為100%。


穩定表達細胞株主要應用于以下研究中:

1、需要長期在目的細胞中研究基因功能。通過構建穩定株,可以大大降低頻繁轉染或者病毒包裝的成本,也方便長期的實驗研究;

2、部分蛋白半衰期及長,瞬時RNA只能干擾表達,無法去除已經表達的目的蛋白,通過構建穩定株可以實驗更好的基因干擾效果;

3、瞬轉會引入不可預期的拷貝數表達(往往瞬時表達較高),導致因為人為因素造成實驗結果的不精確,構建穩定株可以幫助篩選到拷貝數適量的細胞進行實驗研究;

4、穩轉株可以用于誘導表達系統的實驗,用于控制基因的時空表達;

5、需要用目的細胞構建動物模型的實驗,往往需要構建成穩定株。


慢病毒幾乎可以感染所有種類的細胞,并且在感染后可以整合到受感染細胞的基因組,進行長時間的穩定表達,因此,慢病毒常用于制備穩定表達/沉默特定基因的單克隆細胞株。



如何用慢病毒構建穩定表達細胞株:

1、目的細胞的合適抗生素濃度篩選;

2、目的細胞的合適病毒滴度篩選;

3、慢病毒構建與包裝與滴度測定;

4、慢病毒感染;

5、特定抗生素篩選穩轉細胞株;

6、穩轉細胞株鑒定。

穩轉株的構建是一個長時間多平臺合作的項目,有多種因素容易導致穩轉株構建失敗,你都遇到過哪些情況呢?


主站蜘蛛池模板: 色噜噜狠狠色综合网| 人妻插b视频一区二区三区| 黑人入室粗暴人妻中出| 国产午夜精品一区二区三区| 高h猛烈失禁潮喷无码视频| 国产成人不卡无码免费视频| 做受???视频毛片| 成人亚洲a片v一区二区三区麻豆| 国产午夜无码片在线观看影院| 亚洲女久久久噜噜噜熟女| 任你躁久久精品6| 性刺激视频免费观看| 青青草国产成人久久| 红桃视频成人传媒| 欧美 日韩 国产 亚洲 色| 国产自产在线视频一区| 亚洲综合久久无码色噜噜赖水| 欧洲av无码放荡人妇网站| 亚洲中文字幕无码一区| 色综合网天天综合色中文| 久久亚洲熟女cc98cm| 中字幕视频在线永久在线| 在线观看特色大片免费网站| 国产亚洲精品久久久久久久久动漫| 国产亚洲精品拍拍拍拍拍| 亚洲精品久久久久国色天香| 久久国产福利播放| 饥渴丰满少妇大力进入| 性色av一区二区三区咪爱四虎| 女人被狂c躁到高潮视频| 免费的黄网站在线观看| 国产精品美女www爽爽爽视频 | 羞羞影院午夜男女爽爽影院网站 | 观看国产色欲色欲色欲www| 99热精国产这里只有精品| 女女互磨互喷水高潮les呻吟 | 亚洲综合色88综合天堂| 大肉大捧一进一出好爽视频| www夜片内射视频日韩精品成人 | 国产无套精品一区二区| 欧美亚洲国产精品久久蜜芽直播|