轉染是分子生物學中最常用的技術之一,也適用于基因治療的研究。基因治療中蛋白質最大的功能和挑戰之一是為基因產物提供可靠的單特異性檢測試劑,尤其是抗體。因此,基于目標靶蛋白的表達以及核酸質粒的攝取,優化轉染效率尤為重要。過去,瞬時轉染系統大多用于生產天然復合蛋白,這得益于高效轉染方案和懸浮細胞系在高水平生長的可用性密度。對于瞬時表達 ,主要應用HEK-293和CHO-K1細胞系,這兩種細胞系均可適應懸浮培養 ,并且可獲得亞克隆 。
相對于穩定轉染,瞬時轉染具有一個很大的優勢:速度。在穩定轉染需要數周或數月的情況下,瞬時轉染在數天內完成,從而快速、可靠地獲得少量蛋白質來用于實驗。
我們發現了一種簡單,快速和穩健的流式電轉儀瞬轉法,可用作優化轉染效率的工具,實現瞬時表達的最佳途徑,耗時短、成本低、效率高,在蛋白藥物候選基因的構建和篩選及抗體蛋白的小批量生產中具有很大的優勢。這種流式電極技術在較低的電壓下即能產生足夠強度的均勻電場,可實現90%以上的轉染效率和細胞存活率,而且合理的設備及耗材成本也具有顯著的優勢。
X-Porator F1 瞬轉體系介紹
流式電轉儀 X-Porator F1,在使用 CHO-S、293F 等細胞系反復實驗驗證后,形成了一套基于 ExpiCHO-S細胞的高表達電轉體系,為用戶提供了一套穩定、高效的整體方案(包含國產培養體系)。目前,X-Porator F1瞬轉體系實現了克級蛋白表達量,將多家客戶瞬轉表達量較化轉提高了數倍至數十倍。
1、工作流程
▲X-Porator F1專用耗材安裝圖
? 將前一步細胞離心的離心管作為上樣容器,加入質粒和電轉緩沖液;
? 將離心管與 F1 一次性耗材對接,并將全封閉耗材裝配到 F1 設備上;
? 通過蠕動泵驅動細胞懸液,細胞經過電極芯片,在流動狀態下完成電轉染并被后端離心管收集;
? 取出細胞液直接稀釋培養。
2、產品特點
▲X-Porator F1設備和專用耗材包
? 單次可電轉 1L 培養量的細胞;
? 高達 90%以上轉染效率和細胞存活率;
? 較化轉蛋白表達時間更短;
? 符合 GMP 標準的耗材;
? X-Porator F1 設備參數可調整;
? X-Porator F1 電轉適用于細胞原廠培養基的方案,也有國產培養基的替代方案;
? 與其它類似電轉染設備比較,X-Porator F1 瞬轉體系具有顯著的成本優勢。
結果節選
▲實測結果數據節選